NADP磷酸酶(NADPase)樣本的前處理:
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:
① 準(zhǔn)確稱(chēng)取0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞,加入1mL試劑一和10uL試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
② 將勻漿 600g,4℃離心5min。
③ 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11100g,4℃離心10min。
④ 上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的 NOX(此步可選做)。
⑤ 步驟④中的沉淀即為線粒體,加入200uL試劑二和2uL試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10秒,重復(fù)30次),用于NOX活性測(cè)定。
血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
試劑盒性能:
準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。
靈敏度:zui低檢測(cè)濃度小于10 pg/ml。
特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。
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