大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養(yǎng)。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗體
磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗體
磷酸化原癌基因c-Jun抗體
蛋白質酪氨酸激酶JAK2抗體
JWA蛋白抗體
連接蛋白JPH3抗體
連接粘附分子C抗體
蛋白質酪氨酸激酶JAK-1抗體
組蛋白去甲基化酶JMJ2A抗體
組蛋白去甲基化酶JMJD5抗體
磷酸化γ連環(huán)蛋白抗體
JNK相互作用蛋白4抗體
氨基末端激酶1/2抗體
氨基末端激酶1/2/3抗體
氨基末端激酶1/3抗體
連接蛋白JPH4抗體
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