其他沉淀法

一．等電點(diǎn)沉淀法

    兩性電解質(zhì)分子上的凈電荷為零時(shí)溶解度zui低，不同的兩性電解質(zhì)具有不同的等電點(diǎn)，以此為基礎(chǔ)可進(jìn)行分離。如工業(yè)上胰島素時(shí)，在粗提液中先調(diào)PH8.0去除堿性蛋白質(zhì)，再調(diào)PH3.0去除酸性蛋白質(zhì)。ELISA試劑盒

    利用等電點(diǎn)除雜蛋白時(shí)必須了解制備物對(duì)酸堿的穩(wěn)定性，不然盲目使用十分危險(xiǎn)。 不少蛋白質(zhì)與金屬離子結(jié)合后，等電點(diǎn)會(huì)發(fā)生偏移，故溶液中含有金屬離子時(shí)，必須注意調(diào)整PH值。 等電點(diǎn)法常與鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法或其他沉淀方法聯(lián)合使用，以提高其沉淀能力。

二．生成鹽復(fù)合物沉淀法

1．金屬?gòu)?fù)合鹽法 

    許多有機(jī)物質(zhì)包括蛋白在內(nèi)，在堿性溶液中帶負(fù)電荷，能與金屬離子形成沉淀。根據(jù)有機(jī)物與它們之間的作用機(jī)制，可分為羧酸、胺及雜環(huán)等含氮化合物類(lèi)，如銅鋅鎘；親羧酸疏含氮化合物類(lèi)，如概鎂鉛；親硫氫基化合物類(lèi)，如汞銀鉛。蛋白質(zhì)-金屬離子復(fù)合物的重要性質(zhì)是它們的溶解度對(duì)溶液的介電常數(shù)非常敏感，調(diào)整水溶液的介電常數(shù)（如加入有機(jī)溶劑），即可沉淀多種蛋白。

2． 有機(jī)鹽法

    含氮有機(jī)酸如苦味酸、苦酮酸、鞣酸等能與有機(jī)分子的堿性功能團(tuán)形成復(fù)合物而沉淀析出。但此法常發(fā)生不可逆的沉淀反應(yīng)，故用于制備蛋白質(zhì)時(shí)，需采用較溫和的條件，有時(shí)還需加入一定的穩(wěn)定劑。ELISA試劑盒

3．無(wú)機(jī)復(fù)合鹽法

    如磷鎢酸鹽、磷鉬酸鹽等。

    以上鹽類(lèi)復(fù)合物都具有很低的溶解度，極易沉淀析出。若沉淀為金屬?gòu)?fù)合鹽，可通以H2S使金屬變成硫化物而除去，若為有機(jī)酸鹽或磷鎢酸鹽，把有機(jī)酸和磷鎢酸等移入醚中除去，或用離子交換法除去。值得注意的是此類(lèi)方法常使蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆沉淀，應(yīng)用時(shí)必須謹(jǐn)慎。

三． 選擇性變性沉淀 

    其原理是利用蛋白質(zhì)、酶和核酸等生物大分子對(duì)某些物理或化學(xué)因素敏感性不同，有選擇地使之變性沉淀，以達(dá)到分離提純的目的。

    此方法可分為：1）利用表面活性劑或有機(jī)溶劑引起變性；2）利用對(duì)熱的不穩(wěn)定性,加熱破壞某些組分，而保存另一些組分；3）酸堿變性。

四．非離子多聚物沉淀法

    非離子多聚物是六十年代發(fā)展起來(lái)的一類(lèi)重要沉淀劑，zui早用于提純免疫球蛋白、沉淀一些細(xì)菌和病毒，近年來(lái)逐漸廣泛應(yīng)用于核酸和酶的分離提純。這類(lèi)非離子多聚物包括不同分子量的聚乙二醇、EO、葡聚糖、右旋糖酐硫酸鈉等，其中應(yīng)用zui多的是聚乙二醇。ELISA試劑盒

    用非離子多聚物沉淀生物大分子和微粒，一般有兩種方法：1）選用兩種水溶性非離子多聚物組成液液兩相體系，不等量分配，而造成分離。此方法基于不同生物分子表面結(jié)構(gòu)不同，有不同分配系數(shù)。并外加離子強(qiáng)度、PH值和溫度等影響，從而擴(kuò)大分離效果。2）選用一種水溶性非離子多聚物，使生物大分子在同一液相中，由于被排斥相互凝聚而沉淀析出。該方法操作時(shí)先離心除去大懸浮顆粒，調(diào)整溶液PH值和溫度至適度，然后加入中性鹽和多聚物至一定濃度，冷貯一段時(shí)間，即形成沉淀。