參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱(chēng):人支原體PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格
英文名稱(chēng):Mycoplasma hominisPCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
?人支原體PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
產(chǎn)品僅用于科研特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
瓊脂糖蛋白A 英文名稱(chēng): Protein A-Sepharose 其他名稱(chēng): Protein A–Agarose 產(chǎn)品規(guī)格: BR 包裝: 250毫克/1克 級(jí)別:BRextent of labeling :~2 mg/ml
金屬硫蛋白 中文名稱(chēng): 金屬硫蛋白 英文名稱(chēng): MT 其他名稱(chēng): Metallothionein 產(chǎn)品規(guī)格: 混合體,95% 包裝: 10毫克 產(chǎn)品規(guī)格: I型,95%
肌紅蛋白 其他名稱(chēng): 肌球素;肌血球素;肌球蛋白 英文名稱(chēng): Myoglobin from equine skeletal muscle 其他名稱(chēng): Myoglobin from horse skeletal muscle 產(chǎn)品規(guī)格: BR,95-100% 包裝: 250毫克/1克CAS號(hào):100684-32-0
瓊脂糖凝膠4B蛋白A 其他英文名稱(chēng): Protein A–Agarose 產(chǎn)品規(guī)格: BR 包裝: 1毫升 級(jí)別:BRextent of labeling :~6 mg/mlmatrix:Sepharose 4B Fast Flow
纖粘連蛋白 其他名稱(chēng): 纖連蛋白(人血);纖鏈蛋白;粘連蛋白;纖維結(jié)合素;血清纖維結(jié)合蛋白 英文名稱(chēng): Fibronectin from human plasma 其他名稱(chēng): CIG;Cold insoluble globulin 產(chǎn)品規(guī)格: 細(xì)胞培養(yǎng)級(jí),95% 包裝: 1毫克/5毫克 CAS號(hào):86088-83-7
β-乳球蛋白 英文名稱(chēng): β-Lactoglobulin from bovine milk 產(chǎn)品規(guī)格: BR,90% 包裝: 250毫克/1克CAS號(hào):9045-23-2級(jí)別:BR含量 :≥90% (PAGE)
PUC18 產(chǎn)品規(guī)格: BR 包裝: 20微克 級(jí)別:BR濃度:450ug/ml性狀:液體或粉末。pUC18是適合于雙脫氧法DNA測(cè)序的載體,通常運(yùn)用于重組dna的分子克隆中,首先我們制備大腸桿菌的感受態(tài)細(xì)胞(能接受外來(lái)重組的dna),這種感受態(tài)菌株必須不同外來(lái)DNA分子發(fā)生遺傳重組,通常是rec基因缺陷型的突變體,同時(shí)它們必須是限制系統(tǒng)缺陷或限制與修飾系統(tǒng)均缺陷的菌株,即具有具有這三種缺陷(rk mk rec ),同時(shí)對(duì)氨芐青霉素敏感(ap)。puc18載體自身帶有抗氨芐青霉素基因,而外源片段不具有,這樣只有帶有puc18的轉(zhuǎn)化子的菌株才能在氨芐青霉素平板上存活,而外源片段自身環(huán)化的不能存活,這稱(chēng)為抗性篩選。pUC18 上帶有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的調(diào)控序列和β-半乳糖苷酶N 端146 個(gè)氨基的編碼序列,在這個(gè)編碼區(qū)中插有一個(gè)多克隆位點(diǎn),且不影響正常功能,DH5α感受態(tài)菌株帶有β-半乳糖苷酶C 端部分序列的編碼信息,當(dāng)puc18載體在正常情況下同感受態(tài)菌株融合后,互補(bǔ)表達(dá)具有酶活性的蛋白質(zhì),稱(chēng)為α-互補(bǔ)現(xiàn)象,當(dāng)有外源片段插入多克隆位點(diǎn)后,互補(bǔ)現(xiàn)象消失,其形成的菌株顏色具有很大的差異,很容易鑒別,這種篩選方法稱(chēng)為α-互補(bǔ)現(xiàn)象篩選。由上可見(jiàn),puc18載體除了能重組導(dǎo)入外源片段外,在篩選表達(dá)過(guò)程中還具有重要的作用用途:生化研究。克隆外源基因。利用lac promoter進(jìn)行基因表達(dá)。使用M13 primers進(jìn)行DNA測(cè)序。
PUC19 產(chǎn)品規(guī)格: BR 包裝: 20微克 濃度:350ug/ml性狀:液體或粉末。是一種常用克隆載體,由pBR322改造而來(lái),含有抗氨芐青霉素基因、Lac Z基因及與M13mp18相同的多克隆位點(diǎn)。PUC19與PUC18這兩個(gè)質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)幾乎是*一樣的,只是多克隆位點(diǎn)的排列方向相反。重組pUC18/19的克隆轉(zhuǎn)化細(xì)胞可用藍(lán)/白斑法篩選。宿主菌:建議用E.coli DH5α、JM109及XL1-Blue做受體菌用途:生化研究??寺?。插入DNA段的測(cè)序。制備DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)。
人支原體PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格2-Bromo-4-iodoaniline 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
Saikosaponin D 質(zhì)量規(guī)格:>98%,AMPK選擇性抑制劑
Meropenem 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
D(-)-Fructose 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
2,5-Dibromothiophene 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定
POLY(N-VINYLCARBAZOLE) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
5-Chlorosalicylaldehyde 質(zhì)量規(guī)格:檢查
(S)-(+)-NEOMENTHYLDIPHENYLPHOSPHINE 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
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