注意事項(xiàng):
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。產(chǎn)品僅用于科研操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:豬札如病毒札幌病毒PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格
英文名稱:Porcine Sapovirus(PoSaV)()RTPCR
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,產(chǎn)品僅用于科研按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
產(chǎn)品僅用于科研典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
豬札如病毒札幌病毒PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
安息香膠英文名稱: Gum benzoin其他名稱: Resin benzoin;Gum benjamin;Resin benjamin產(chǎn)品規(guī)格: BR包 裝: 100克CAS號(hào):9000-72-0級(jí)別:BR
松香其他名稱: 1,2,3,4,4a,4b,5,6,10,10a-十氫化-1,4a-二甲基-7-異丙基-1-菲甲;樅;松脂;熟松香;樹(shù)脂英文名稱: Abietic acid其他名稱: Rosin Acid;Sylvic Acid產(chǎn)品規(guī)格: BR,75%包 裝: 25克/100克CAS號(hào):514-10-3
1,1,2-三三乙英文名稱: 1,1,2-Trichlorotrifluoroethane其他名稱: 1,1,2-Trichloro-1,2,2-trifluroethane;Fluorocarbon 113;Freon 113;Refrigerant 113產(chǎn)品規(guī)格: AR,99.9%包 裝: 250毫升/1升CAS號(hào):76-13-1C2Cl3F3=187.38
阿魏乙酯其他名稱: 4-羥基-3-甲氧基肉桂乙酯英文名稱: Ethyl ferulate其他名稱: Ethyl 4'-hydroxy-3'-methoxycinnamate產(chǎn)品規(guī)格: BR,97%包 裝: 5克/25克/100克CAS號(hào):4046-02-0
大豆油其他名稱: 豆油英文名稱: Soybean oil其他名稱: Soya oil from Glycine max產(chǎn)品規(guī)格: BR包 裝: 250毫升/1升CAS號(hào):8001-22-7
鞣花其他名稱: 棓原;逆沒(méi)食子;二縮雙(三羥基甲);2,3,7,8-四羥基-[1]-并吡喃并[5,4,3-CDE][1]并吡喃-5,10-二;柔花;二縮雙(三羥基甲)英文名稱: Ellagic acid其他名稱: 2,3,7,8-tetrahydroxy(1)benzopyrano(5,4,3-cde)(1)benzopyran-5,10-dione;4,4',5,5',6,6'-Hexahydroxydiphenic acid 2,6,2',6'-dilactone產(chǎn)品規(guī)格: BR,96%包 裝: 5克/25克/100克CAS號(hào):476-66-4
聚乙烯醇縮甲溶膠英文名稱: PVF其他名稱: Polyvinyl formal產(chǎn)品規(guī)格: BR,10%包 裝: 100克CAS號(hào):63148-64-1級(jí)別:BR
尿其他名稱: 2,6,8-三羥基嘌呤;7,9-二氫-2,6,8(3H)三-1H-嘌呤;2,6,8,-三羥基尿雜環(huán);三氧化嘌呤英文名稱: Uric acid其他名稱: 2,6,8-Trihydroxypurine產(chǎn)品規(guī)格: BR,99%包 裝: 25克/100克/500克CAS號(hào):69-93-2
豬札如病毒札幌病毒PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格3,4,5-Trimethoxyphenylacetic acid 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)(T)
Zinc iodate 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)
4-Methylcinnamic acid 質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(GC)
N-Benzyl-N-ethylaniline 質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(GC)
TUNICAMYCIN 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)
ALPHA-ISO-METHYLIONONE 質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(GC)
Thymolphthalein 質(zhì)量規(guī)格:>88.0%(GC)
Nitrobenzene 質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(GC)
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