傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶?jī)?nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞永生化

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無菌，且須在無菌超凈工作臺(tái)中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長(zhǎng)。來源于不同動(dòng)物種類、組織類型的細(xì)胞，對(duì)培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對(duì)于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)起著關(guān)鍵作用?？筛鶕?jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過大對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴?，?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

Mouse FMS like tyrosine kinase 3 ligand (Flt3L) ELISA Kit 小鼠FMS樣酪激酶3配體(Flt3L)ELISA試劑盒

大鼠腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒 ，英文名： iFABP ELISA Kit

ELISA 小鼠粒細(xì)胞集落刺激因子(mouse G-CSF) 48T/96T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforLDLELISAKit大鼠低密度脂蛋白規(guī)格：48T/96T

通用型N-乙酰-β-D-氨基糖苷酶(NAG)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

人球菌蛋白A(SPA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

小鼠心肌肌鈣蛋白(cTn-Ⅰ)免疫試劑盒 Mouse cardiac oponin Ⅰ,cTn-Ⅰ ELISA kit

弧菌CTX基因檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

HumanSalmonellatyphiaigen,St-AgELISA試劑盒人抗原(St-Ag)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

ELISAKitANG-4小鼠血管生成素4規(guī)格：48T/96T

ELISAKitsIgA大鼠分泌型A規(guī)格：48T/96T

大鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒 ，英文名： FDP ELISA Kit

人β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanamyloidbetapeptide1-42,Aβ1-42ELISAKit96T 96T/48T

大鼠P0蛋白(p0)免疫試劑盒 Rat myelin protein zero,p0 ELISA Kit

CLIAKitforSoybeanagglinin,SBAELISAKit大豆凝集素規(guī)格：48T/96T

腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體抗體

冠狀病毒刺突糖蛋白抗體

肉毒堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶1A抗體

MSL2抗體

線粒體二羧酸載體蛋白20抗體

白細(xì)胞介素1受體相關(guān)激酶1結(jié)合蛋白1抗體

磷酸化P63腫瘤抑制基因抗體

CD8抗體

小鼠結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞永生化血小板源性生長(zhǎng)因子受體A/PDGFRα抗體