原代細(xì)胞的培養(yǎng)是指直接從機(jī)體取下細(xì)胞、組織和器官后立即進(jìn)行培養(yǎng)。因此,較為嚴(yán)格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng),此時的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì),如果是正常細(xì)胞,仍然保留二倍體數(shù)。因為可以模擬機(jī)體的功能,主要用于:生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究。
原代細(xì)胞的傳代和凍存過程:
細(xì)胞傳代:
原代細(xì)胞有間隙抑制接觸不良反應(yīng),所以細(xì)胞不能到達(dá)全部的密度的時候傳代,一般有效的建議觀察細(xì)胞的生長周期,原代細(xì)胞在細(xì)胞密度達(dá)到85%左右的時候傳代較佳,當(dāng)生長至全部匯合時,它就會衰老。記住,所有的原代細(xì)胞不是全純,因此我們要盡量減少污染細(xì)胞的生長。當(dāng)細(xì)胞傳代時,使用低濃度的胰蛋白酶,也可以嘗試下整體消化套裝,并在顯微鏡下密切監(jiān)測細(xì)胞。此外,記得在胰蛋白酶消化后*中和細(xì)胞中的胰酶,因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細(xì)胞。
細(xì)胞凍存:
通常不推薦重新凍存原代細(xì)胞,因為這可以促進(jìn)細(xì)胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代?xì)胞非常敏感,重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡或損傷。
與細(xì)胞系不同,原代細(xì)胞增殖有限,我們建議盡早使用原代細(xì)胞進(jìn)行實驗以防止遺傳漂移,如果你正在使用一個增殖困難的細(xì)胞類型,你應(yīng)該密切監(jiān)測細(xì)胞形態(tài),因為少量混雜的細(xì)胞(如成纖維細(xì)胞)可能隨著時間的推移,大量生長從而成為主要細(xì)胞。